Die Galerie hat ihren Sitz in einem der bekanntesten und bedeutendsten architektonischen Bauten des frühen 15. Jh. von Florenz, im Auftrag der Wollzunft von Filippo Brunelleschi errichtet. Das „Spedale“ (Spital, Heim) war dazu bestimmt, verlassene Kinder aufzunehmen, die hier aufgezogen und in einem Beruf ausgebildet wurden, was ihnen die Eingliederung in die Gesellschaft ermöglichen sollte

In dem Zusammenspiel von Refektorien, Kreuzgängen, Schlaf- und Krankensälen, Ammenzimmern und Säulengängen lieferte Brunelleschi ein harmonisches und ausgeglichenes Exempel der rationalen Krankenhausarchitektur, das im Laufe der Zeit noch erweitert und mit Fresken ausgeschmückt wurde, welche die lange Zeit des Bestehens der Einrichtung belegen, wie auch die Gunst der herrschenden Dynastie, der Medici. Die Galerie hat einen geeigneten Sitz in dem oberen Bogengang des Klosters und im ehemaligen Aufenthaltssaal der Kinder gefunden, der sich über dem Säulengang der Fassadenseite befindet. Sie umfaßt kostbare Werke, die allerdings nur einen kleinen Teil der beachtlichen Anzahl an Kunstgegenständen ausmachen, die sich in dem Spital im Laufe der Jahrhunderte angesammelt hatten durch Schenkungen, Hinterlassenschaften oder Hinterlegungen, oder durch eigens für das Heim ausgeführte Werke. Die berühmtesten Stücke (Della Robbia, Beato Angelico, Vasari, Giambologna) wurden im 19. Jh. zerstreut; was übrigblieb (dennoch von erstklassiger Qualität) sind Gemälde auf Holz, abgelöste Fresken, Möbel, Ausstattungsgegenstände und eine Reihe herrlicher Miniaturkodizes aus dem 14. und 15. Jh., die zu den wertvollsten erhaltenen in Florenz zählen.Zu den bedeutendsten Gemälden sei auf die „Adorazione dei Magi“ (Anbetung durch die hl. Drei Könige) von Domenico Ghirlandaio (1449 - 1494) hingewiesen, die für die Spitalkirche ausgeführt wurde. In dem Gemälde mit seinem prachtvollen Farben- und Detailreichtum sind unter den Figuren, die das Kind umgeben, einige Portraits eingearbeitet von historischen Personen die mit dem Spital in Verbindung standen, wie Händler der Seidenkunst und Bedienstete.

Neben einigen kostbaren „fondo oro“ (Gemälden auf Goldgrund) hoher Qualität besitzt die Galerie auch eine „Madonna col Bambino“ (Madonna mit dem Kinde), die dem jungen Botticelli (1445-1510) zugeschrieben wird und in dem noch der Einfluß des Meisters Filippo Lippi erkennbar ist; ferner eine der harmonischsten glasierten Terrakotten von Luca della Robbia; ein Altarbild von Piero di Cosimo (1461/62 - 1521), ebenfalls für die Spitalkirche ausgeführt sowie eine charakteristische „Madonna degli Innocenti“ (Madonna der Unschuldigen) der Schule von Granacci (1469-11283), welcher den Kindern mit seinem Mantel Schutz bietet und hinter dessen Schultern der Säulengang Brunelleschis des Spitals selbst zu sehen ist.